MonoSelect RP-mAb單克隆抗體專(zhuān)用色譜柱

MonoSelect RP-mAb單克隆抗體專(zhuān)用柱

抗體是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它是一種由漿細(xì)胞分泌，被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)。抗體藥物中使用到的單克隆抗體（IgG）在生產(chǎn)工藝（細(xì)胞培養(yǎng)、分離純化）與保存過(guò)程中易發(fā)生不均一性的變化，這些不均一性會(huì)使藥物的藥效、安全性方面受到影響。
  而隨著生產(chǎn)工藝及分析手段的進(jìn)步，單克隆抗體類(lèi)藥物的質(zhì)量控制將更加嚴(yán)格。高效液相色譜（HPLC）作為一種分離技術(shù)，在蛋白質(zhì)、抗體等生物大分子的分離分析方面已得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。但是，目前市面上的方法分析單克隆抗體存在著響應(yīng)不高，峰型不好或者理論塔板數(shù)不佳的情況。而GL Sciences新上市的MonoSelect RP-mAb單克隆抗體專(zhuān)用柱可以有效解決此類(lèi)問(wèn)題。

MonoSelect RP-mAb單克隆抗體專(zhuān)用色譜柱 ·  基本參數(shù)：

基體：高純度整體化硅膠
貫通孔尺寸：1 μm
中孔尺寸：60 nm
表面積：50 m2/g
化學(xué)鍵基團(tuán)：苯基
含碳量：2 %
內(nèi)徑：2.1 mm
長(zhǎng)度：20 mm
色譜柱類(lèi)型：柱套式
推薦工作溫度：80 ℃
推薦工作壓力：40 MPa
推薦工作pH范圍：2～7.5

·  何謂整體化硅膠柱

·  特點(diǎn)

多檢體快速分析
通過(guò)利用硅膠整體柱的低壓特性，MonoSelect RP-mAb可以在高流速下快速分析。

實(shí)現(xiàn)低濃度下高靈敏度分析

在蛋白質(zhì)分析中，尤其是在低濃度分析中，峰形可能會(huì)變形。

MonoSelect RP-mAb硅膠整體孔的介孔設(shè)計(jì)為60 nm，適合mAb分析，表面經(jīng)過(guò)惰性化處理，低濃度分析下也能得到尖銳的峰形 。

提升高溫測(cè)定時(shí)色譜柱的耐久性

為防止高分子量蛋白質(zhì)分析出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，需要在高溫（約80°C）下進(jìn)行測(cè)量。即使在存在TFA的流動(dòng)相條件下，MonoSelect RP-mAb在80°C時(shí)仍具有出色的耐久性。

Column:  MonoSelect-RP mAb
Eluent:  A：H2O (0.1 %TFA)       B：MeCN(0.1 %TFA)
Gradient:  A/B = 90/10-(10 min)-10/90-(0.1 min)-90/10-(20 min)-90/10
Flow Rate:  0.3 mL/min 
Oven Temp.:  80 ℃
Injection Vol.：5 μL

應(yīng)用實(shí)例
1. 還原處理前后的輔助因子分析
MonoSelect RP-mAb不僅可以用于分析還原前的抗體，還可以用于分析輔助因子。

2. 木瓜蛋白酶處理的抗體消化物分析
木瓜蛋白酶是在活性位點(diǎn)具有巰基的非特異性硫醇內(nèi)肽酶。在還原劑的存在下，IgG分子在一個(gè)或多個(gè)鉸鏈區(qū)中切割肽鍵，從而產(chǎn)生兩個(gè)Fab片段和一個(gè)Fc片段。
通過(guò)使用Monoselect RP-mAb，您可以監(jiān)控木瓜蛋白酶對(duì)mAb的消化狀態(tài)。

3. ADC(抗體藥物偶聯(lián)物)分析案例研究
分析條件
Eluate:
A) 0.075 % FA + 0.025 % TFA in H2O 
B) 0.075 % FA+0.025 % TFA in ACN  A/B = 80/20-(5min)-40/60
Flow rate: 0.3 mL/min 
Oven Temp.: 80 ℃ 
Detection: 214 nm 
Injection Vol.: 1 mL
Sample: SigmaMAb Antibody Drug Conjugate (ADC) Mimic (1 mg/mL)  (Antibody Cysteine-Fluorophore Conjugate Standard)

通過(guò)使用MonoSelect RP-mAb，可以知道ADC的藥物-抗體比率（知道在哪個(gè)二硫鍵位置通過(guò)連接器將藥物導(dǎo)入的分布量）。